Simoa Homebrew 方法开发服务
Simoa技术是由Quanterix公司开发的一种超灵敏的平台,能够以比目前最好的免疫分析方法高1000倍的灵敏度测量单个蛋白质(或其他分子,如核酸等),为解决生命科学研究中未满足的重大需求开辟了新的应用。Simoa技术同时具有自主开放的优势,研究者可使用Quanterix 公司Homebrew开发试剂盒,搭配使用自己的抗体/试剂或是商业抗体/试剂自行开发标志物检测试剂盒。
我公司于2018引进Simoa技术平台,此后开设Simoa Homebrew 方法开发服务项目,为国内多家医院、院校、科研机构提供方法开发服务。
基础步骤 |
• | 筛选一对抗体对 |
• | 抗体正反向包被/结合(一抗体结合生物素,一抗体偶联到磁珠) |
• | 上机测试,确定基本条件 |
• | 进一步优化 |
开发材料要求 |
▶ | 抗体对选择 |
• | 优先选择单克隆抗体 |
• | 抗体对目标蛋白具有高度特异性,与相关蛋白无交叉反应,按需考虑物种特异性 |
• | 成对抗体之间或抗体与其他蛋白质之间的相互作用比较弱 |
• | 抗体抗原具有高亲和力,结合动力参数可通过SPR 技术进行验证 |
• | 抗体缓冲液或干粉中不含胺类物质(Tris、叠氮化物、游离氨基酸、BSA 等) |
• | 抗体缓冲液或干粉中不含甘油、明胶、海藻糖、吐温等大分子物质 |
• | 经传统 ELISA 验证过的抗体对并获得初步的检测参数(检测限 1–100 pg/mL) |
• | 每个抗体材料总量需>300 μg,浓度>1mg/mL,pI≠6.2 以及分子量>100KD |
▶ | 标准品选择 |
• | 评估各种抗原表达载体 |
• | 做好不同的来源/供应商,材料批次稳定性评估 |
• | 抗原在冷冻保存期间和室温检测期间稳定性高 |
• | 优先选用纯化的蛋白质、肽,无 Avidin、Striptavidin 等标签修饰 |
• | 与抗体亲和力高 |
• | 所需总量:5-10μg |
▶ | 其他注意事项 |
• | 抗体公司推荐: |
国外:RD > abcam(有“only pbs”抗体)> RayBiotech,sigma,origene,BD,thermo | |
国内:义翘神州、远泰(Promab) | |
• | 可挑选多对抗体材料进行常规 ELISA或SPR 技术验证并筛选出 1 对较好的材料进行 Simoa 开发 |
注:具体要求可联系咨询! | |
联系咨询方式 | |
▶ | 杭州晶佰生物技术有限公司 |
• | 联系电话:18268847457 |
• | 联系地址:浙江省杭州市余杭区金昌路2073号2-3号楼6楼 |
• | 联系邮箱:hyshi@igeneseq.com |
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生物标志物研究